Das Schicksal von Roanoke Island, der Heimat des ersten Versuchs Englands, eine dauerhafte Kolonie in Nordamerika zu gründen, bleibt eines der größten Rätsel der Geschichte. Während sich ein Großteil der Diskussion um Roanoke auf das Verschwinden der „verlorenen Kolonie“ im späten 16. Jahrhundert konzentriert, wird oft die Frage übersehen, ob die Spanier jemals versucht haben, die Siedlung zu erobern oder anzugreifen. Angesichts der erbitterten Rivalität zwischen England und Spanien in dieser Zeit ist dies eine berechtigte Überlegung.
Spanien, die damals dominierende Kolonialmacht Amerikas, war sich der Versuche Englands, in der Neuen Welt Fuß zu fassen, durchaus bewusst. Die Spanier betrachteten diese Bemühungen als direkte Bedrohung ihrer Gebietsansprüche, insbesondere in Florida und der Karibik. Die englische Piraterie, angeführt von Persönlichkeiten wie Sir Francis Drake, hatte die Beziehungen zwischen den beiden Nationen bereits belastet, und Spanien hatte allen Grund, die englischen Kolonialambitionen zu durchkreuzen.
Historische Aufzeichnungen lassen darauf schließen, dass spanische Beamte von der Siedlung in Roanoke wussten und einen Angriff erwogen. Geheimdienstberichte spanischer Spione deuteten darauf hin, dass England versuchte, an der nordamerikanischen Küste eine Basis zu errichten, möglicherweise als Ausgangspunkt für Kaperüberfälle auf spanische Schiffe. Obwohl die spanische Krone Aufklärungsmissionen anordnete und es Berichte über spanische Schiffe gab, die die Region erkundeten, kam es jedoch nicht zu einer endgültigen Invasion von Roanoke Island. Die Spanier konzentrierten sich mehr darauf, ihre eigenen Gebiete zu schützen und englische Einfälle in der Karibik und in Florida abzuwehren, insbesondere in St. Augustine, das Drake 1586 angriff.
Letztendlich war Roanokes Verschwinden nicht auf einen spanischen Angriff zurückzuführen. Die Kolonie hatte bereits mit Versorgungsengpässen, Konflikten mit indigenen Gruppen und mangelnder Unterstützung durch England zu kämpfen. Als Gouverneur John White 1590 zurückkehrte, war die Siedlung verlassen, und nur das Wort „CROATOAN“ war als kryptischer Hinweis in einen Pfosten geritzt. Auch wenn die Spanier eine potenzielle Bedrohung darstellten, war Roanokes Untergang wahrscheinlicher auf interne Schwierigkeiten als auf einen militärischen Angriff von außen zurückzuführen.
