Le sort de l'île de Roanoke, qui a accueilli la première tentative anglaise d'établissement d'une colonie permanente en Amérique du Nord, reste l'un des plus grands mystères de l'histoire. Si la plupart des discussions autour de Roanoke se concentrent sur la disparition de la « colonie perdue » à la fin du XVIe siècle, une question souvent négligée est de savoir si les Espagnols ont jamais tenté d'envahir ou d'attaquer la colonie. Étant donné la rivalité féroce entre l'Angleterre et l'Espagne à cette époque, cette question est tout à fait légitime.
L'Espagne, puissance coloniale dominante des Amériques à l'époque, était parfaitement consciente des tentatives de l'Angleterre de s'implanter dans le Nouveau Monde. Les Espagnols considéraient ces efforts comme une menace directe à leurs revendications territoriales, notamment en Floride et dans les Caraïbes. La piraterie anglaise, menée par des personnages comme Sir Francis Drake, avait déjà tendu les relations entre les deux nations, et l'Espagne avait toutes les raisons de contrarier les ambitions coloniales anglaises.
Les documents historiques suggèrent que les fonctionnaires espagnols étaient au courant de la colonie de Roanoke et envisageaient de lancer une attaque. Les rapports de renseignement des espions espagnols indiquaient que l'Angleterre tentait d'établir une base le long de la côte nord-américaine, potentiellement comme base de départ pour des raids de corsaires contre les navires espagnols. Cependant, bien que la Couronne espagnole ait ordonné des missions de reconnaissance et que des rapports aient fait état de navires espagnols explorant la région, aucune invasion définitive de l'île de Roanoke n'a eu lieu. Les Espagnols étaient davantage concentrés sur la protection de leurs propres territoires et sur la répression des incursions anglaises dans les Caraïbes et en Floride, en particulier à Saint-Augustine, que Drake a attaquée en 1586.
En fin de compte, la disparition de Roanoke n'était pas due à une attaque espagnole. La colonie était déjà aux prises avec des pénuries d'approvisionnement, des conflits avec des groupes autochtones et un manque de soutien de la part de l'Angleterre. Au moment où le gouverneur John White revint en 1590, la colonie était abandonnée, avec seulement le mot « CROATOAN » gravé sur un poteau comme indice énigmatique. Bien que les Espagnols aient pu constituer une menace potentielle, la chute de Roanoke était plus probablement due à des difficultés internes plutôt qu'à une attaque militaire externe.
